Porque são as esporas a referência: G. stearothermophilus e valores D em VHP

Cada ciclo VHP numa unidade farmacêutica é avaliado através de um pequeno disco de aço com cerca de um milhão de esporas bacterianas. Se essas esporas não apresentarem crescimento após o ciclo, o ciclo passa no ensaio. Este guia centra-se no próprio indicador biológico: porque é que um microrganismo, Geobacillus stearothermophilus, se tornou a referência, o que significam os números no certificado de um indicador biológico, como se calculam os valores D e as reduções logarítmicas de esporas, e o que fazer quando um indicador apresenta crescimento quando não deveria.

O que é um indicador biológico para VHP

Um indicador biológico (IB) para VHP é um suporte, normalmente um pequeno disco de aço inoxidável, inoculado com uma população conhecida de esporas bacterianas, habitualmente 10⁶ Geobacillus stearothermophilus, e acondicionado numa bolsa que permite a entrada de vapor de peróxido de hidrogénio, mas impede a entrada de outros microrganismos. Após a exposição, o suporte é transferido para um meio de cultura e incubado. A ausência de crescimento significa que as esporas nesse suporte foram inativadas.

Para saber onde colocar os indicadores e como funciona o método de meio ciclo, consulte como se valida um ciclo VHP. Este artigo centra-se no próprio indicador.

Porquê esporas e porquê este microrganismo

As esporas bacterianas estão entre os microrganismos mais resistentes ao peróxido de hidrogénio. O seu revestimento, núcleo desidratado e ADN protegido atrasam a oxidação que destrói rapidamente outras células. Para conhecer a química deste processo, consulte como o peróxido de hidrogénio destrói microrganismos.

G. stearothermophilus é utilizado por várias razões práticas:

• Elevada resistência ao vapor de peróxido de hidrogénio em comparação com outros microrganismos formadores de esporas ensaiados, pelo que um ciclo que o inativa tem margem para microrganismos menos resistentes.
• Cresce a 55–60 °C. A maioria dos contaminantes ambientais cresce a 30–35 °C, pelo que é menos provável um falso positivo devido a um contaminante acidental.
• Não é um agente patogénico humano, pelo que os indicadores podem ser manuseados em laboratórios convencionais.
• Está bem caracterizado e encontra-se disponível sob a forma de indicadores comerciais normalizados com resistência documentada.

Como é constituído um indicador para VHP

Como interpretar um certificado de IB

Cada lote de indicadores é acompanhado de um certificado. Verifique estes pontos antes da utilização:

Valor D: a velocidade de inativação

O valor D é o tempo de exposição necessário, em condições especificadas, para reduzir uma população de esporas em 90%, ou seja, uma ordem logarítmica. Se um indicador tiver um valor D de 2 minutos, uma redução de 6 log exige cerca de 12 minutos nas mesmas condições.

Ao contrário da esterilização por vapor, o VHP não tem um conjunto único de condições normalizadas de ensaio de resistência utilizado por todos os fabricantes. Um valor D só tem significado em conjunto com a concentração e a temperatura a que foi medido. Dois certificados com condições diferentes não podem ser comparados diretamente. Ao mudar de fornecedor ou de lote de indicadores, verifique se a resistência declarada continua a ser adequada ao ciclo.

Redução logarítmica de esporas (SLR)

A redução logarítmica de esporas compara a população inicial com as sobreviventes:

SLR = log₁₀(N₀) − log₁₀(N_f)

N₀ é a população no suporte antes da exposição e N_f o número de sobreviventes. Quando nenhuma espora sobrevive, o resultado só pode ser apresentado como superior ou igual a log₁₀(N₀). Com 2.1 × 10⁶ esporas e sem crescimento, o indicador demonstra uma SLR de pelo menos 6.3. É por isso que uma população de 10⁶ é utilizada para demonstrar uma redução de 6 log.

Cálculo de um valor D a partir de resultados de fração negativa

Quando alguns indicadores de um grupo apresentam crescimento e outros não, o valor D pode ser estimado pelo método Stumbo-Murphy-Cochran:

D = U / (log₁₀N₀ − log₁₀(ln(n/r)))

U é o tempo de exposição, n o número de indicadores expostos e r o número que não apresentou crescimento. Exemplo de cálculo:

Estes cálculos são utilizados nos ensaios de resistência e no desenvolvimento do ciclo. Na validação de rotina, a pergunta habitual é mais simples: todos os indicadores em todas as localizações apresentaram ausência de crescimento?

Quando um indicador apresenta crescimento

Um indicador positivo num ciclo de validação deve ser investigado antes de o resultado ser aceite ou rejeitado. Etapas habituais:

• Identificar o microrganismo. Se não for G. stearothermophilus, o crescimento resultou de contaminação durante o manuseamento e a técnica de transferência deve ser revista.
• Verificar a localização. Um ponto frio, um canto protegido da exposição ou uma superfície absorvente próxima podem reduzir a exposição. Resultados positivos repetidos no mesmo local apontam para um problema real de distribuição.
• Verificar o indicador. Bolsas danificadas, esporas aglomeradas ou um lote com resistência invulgarmente elevada podem originar sobreviventes isolados, por vezes designados atípicos.
• Verificar os controlos. Um indicador não exposto do mesmo lote deve apresentar crescimento, e o meio não inoculado deve permanecer límpido.

Um resultado positivo não deve simplesmente ser repetido até se obter aprovação. A investigação e a sua conclusão fazem parte do registo de validação.

Manuseamento correto dos indicadores

• Armazene os indicadores conforme indicado no certificado e utilize-os antes do fim do prazo de validade.
• Registe a localização de cada indicador num mapa ou através de posições numeradas.
• Transfira os suportes expostos para o meio de forma assética, idealmente numa câmara de fluxo laminar.
• Incube durante todo o tempo indicado pelo fabricante antes de registar um resultado negativo.
• Inclua um controlo positivo do mesmo lote em cada série.

Os indicadores químicos e enzimáticos podem fornecer informação mais rápida durante o desenvolvimento do ciclo, mas não substituem os indicadores biológicos. Consulte indicadores químicos, enzimáticos e biológicos para VHP.

Equipamento VHP Fenggu

O equipamento VHP Fenggu, incluindo esterilizadores VHP móveis para salas, sistemas VHP integrados no AVAC, pass boxes VHP e o esterilizador VHP BIBO, apoia o desenvolvimento e a validação de ciclos com um objetivo de redução de pelo menos 6 log de Geobacillus stearothermophilus. A eficácia real é estabelecida pelo protocolo e pelo relatório de validação de cada projeto. A Fenggu fornece colocação em serviço no local e formação de operadores para o equipamento que fornece.

Todos os equipamentos VHP: esterilizadores e geradores VHP.

Perguntas frequentes

Porque é a população de 10⁶?
Um indicador só pode demonstrar tantas ordens logarítmicas de redução quantas a sua população inicial permitir. Uma população de cerca de um milhão de esporas permite que um único indicador demonstre uma redução de 6 log.

Posso comparar valores D de dois fornecedores?
Apenas se tiverem sido medidos nas mesmas condições. Os valores D de VHP dependem fortemente da concentração e da temperatura, e os fornecedores não utilizam todos as mesmas condições de ensaio.

Porque são preferidos os suportes de aço inoxidável para VHP?
Representam as superfícies duras a descontaminar e não absorvem peróxido de hidrogénio. Os suportes absorventes podem reter peróxido e alterar o resultado.

Durante quanto tempo devem os indicadores ser incubados?
Conforme indicado pelo fabricante do indicador, habitualmente a 55–60 °C durante um máximo de 7 dias. Registar um resultado negativo demasiado cedo pode impedir a deteção de sobreviventes de crescimento lento.

Um único indicador positivo significa que o ciclo falhou?
Não automaticamente, mas deve ser investigado. Se o microrganismo for G. stearothermophilus e a causa não for um erro de manuseamento, o ciclo ou a distribuição nessa localização requer atenção.

Referências

• Norma sobre indicadores biológicos: ISO 11138-1:2017, Sterilization of health care products — Biological indicators — Parte 1: General requirements
• ISO 11138-7:2019, Sterilization of health care products — Biological indicators — Part 7: Guidance for the selection, use and interpretation of results
• USP <55> Biological Indicators — Resistance Performance Tests
• USP <1229.5> Biological Indicators for Sterilization
• PDA Technical Report No. 51: Biological Indicators for Gas and Vapor-Phase Decontamination Processes

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